Essai des endotoxines bactériennes
Les endotoxines bactériennes sont des molécules pyrogènes* issues des bactéries Gram négatif.
L'essai des endotoxines bactériennes décrit dans le chapitre 2.6.14 de la Pharmacopée Européenne est basé sur le principe que le lysat d'amoebocyte de limule (c'est-à-dire le « sang ») réagit en présence d'endotoxines bactériennes pour donner soit une coagulation soit un trouble soit une coloration jaune selon la technique employée.
L'essai montré dans ce support correspond à la méthode colorimétrique cinétique (méthode D de la Pharmacopée Européenne) : si l'échantillon contient des endotoxines bactériennes, une coloration jaune se produira d'autant plus rapidement qu'il y a d'endotoxines dans l'échantillon.
Cet essai nécessite plusieurs étapes décrites en suivant.
Définition :
*Pyrogène : substances qui déclenchent une élévation thermique de l'organisme.
Étape 1 : dépôts
Voici la plaque de micropuits où les réactions vont se produire pour rechercher la présence d'endotoxines bactériennes dans l'échantillon
100 µL prélevés à l'aide d'une pipette automatique et de cônes stériles et apyrogènes sont déposés dans les puits.
Dans l'exemple, 6 échantillons sont analysés.
Informations[1]Étape 2 : ajout du réactif : lysat d'amoebocyte de limule (LAL)
100 µL de LAL sont ajoutés dans chaque puits qui contient déjà un dépôt.
Informations[2]Étape 3 : incubation pour permettre la réaction
La réaction n'est possible qu'à 37°C, la plaque de micropuits est donc placée dans une enceinte thermostatée qui maintient également une agitation constante.
Informations[3]
Informations[4]Étape 4 : attendre que la réaction se fasse !
L'appareil mesure l'absorbance dans chaque micropuits et l'affiche en temps réel.
Les résultats finaux sont obtenus au bout de 45 minutes environ.
Étape 5 : analyse des résultats
Le logiciel d'analyse fournit :
