Sédimentation - ultracentrifugation
Cours

Sédimentation en gradient de densité

Il s'agit d'une sédimentation à l'équilibre dans un gradient de solvant. Dans ce type de méthode, les molécules se sépareront selon leur densité et non leur masse.

Cette technique permet de déterminer une masse ou un coefficient de sédimentation S relatif par rapport à des protéines de référence.

Il existe 2 types de gradient : le gradient isopycnique et gradient isocinétique

Gradient isopycnique : On réalise un gradient de densité (continu ou discontinu) encadrant la masse volumique de la protéine.

  • Pour les protéines, un gradient de saccharose

  • Pour les acides nucléiques, un gradient de chlorure de césium

gradient_densite

Au bout d'un temps suffisamment long de centrifugation, la protéine s'arrête au niveau où sa densité est égale à celle du solvant.

Gradient isocinétique :La vitesse de sédimentation varie avec la distance à l'axe du rotor, on peut mesurer S en utilisant des protéines étalon et en les faisant migrer dans le même gradient.

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