EXEMPLE D'UN ENSEIGNEMENT PRATIQUE DE PHARMACOGNOSIE : Cas du Café vert - Caféine

Procéder à l'extraction de la caféine par simple lixiviation (à chaud) au moyen d'une cafetière électrique classique.

Peser 40 g de poudre de café vert et les placer dans le filtre de la cafetière.

Placer 450 ml d'eau dans le compartiment approprié puis procéder à la lixiviation.

Une fois le lixiviat refroidi, ajouter de la lessive de soude (50 g/l) jusqu'à atteindre un pH franchement basique (vérifier au papier pH).

Cette solution aqueuse fera alors l'objet d'une extraction liquide-liquide par le dichlorométhane (1 x 150 ml + 1 x 75 ml). Aucune délipidation n'ayant était mise en oeuvre, un risque important de formation d'émulsion existe. Pour les éviter, procéder à l'extraction par « simples retournements » de l'ampoule (sans agitation brutale, 15 à 20 fois).

Réunir les solutions organiques dans un Erlen sec (250 ml) et sécher sur sulfate de sodium. Filtrer (papier filtre) directement dans un ballon à col rodé, parfaitement sec (en plusieurs fois : maximum de remplissage = 125 ml). Concentrer au maximum par évaporation sous pression réduite (rotavapor).

Redissoudre la caféine, qui s'est déposée sur les parois, dans un minimum d'éthanol (quelques millilitres), en chauffant et éventuellement, en grattant à l'aide d'une spatule. Transférer la solution dans un flacon de 30 ml de capacité. Rincer le ballon avec 2 fois 2 ml d'éthanol "bouillant" (placer le fond du ballon dans l'eau du bain-Marie) pour récupérer le maximum de caféine et transvaser les 2 aliquotes dans le flacon, à l'aide d'une pipette Pasteur munie d'une petite poire.

Laisser refroidir la solution. La caféine cristallise spontanément, à la température ambiante, sous forme de longues aiguilles fines et soyeuses. Prélever une goutte de cette solution et la disposer sur une lame de microscope. Sous la lamelle, observer les cristaux en formation (grossissement = 40). Dessiner les cristaux.

Filtrer les cristaux de caféine sur Buchner, équipé de deux épaisseurs de papier filtre, de diamètre approprié. Après avoir brisé le vide, laver les cristaux, en plusieurs fois, par quelques ml d'éther éthylique. Les sécher en plaçant le filtre sous vide.

Prélever quelques cristaux pour le contrôle CCM (« solution b »).

Étaler les cristaux dans une capsule de verre (boîte de Pétri) préalablement tarée (précision 1/10000 g), et les faire sécher dans un dessiccateur garni de desséchant, pendant 30 minutes environ. Sortir du dessiccateur et pesez immédiatement la poudre sèche de caféine base.

Calculer le rendement d'extraction en caféine cristallisée, à partir du café vert "sec" (en tenant compte de la teneur en eau de la poudre).