Outils du diagnostic virologique des infections à CMV

A partir d'un échantillon de sérum, on recherche des IgG ou des IgM anti-CMV. Il existent des trousses commerciales ELISA détectant les IgG ou les IgM.

• Les IgM persistent 16 à 20 semaines après une primo-infection,

• Les IgG s'élèvent après une primo-infection et de nouveaux pics peuvent apparaître lors d'une réactivation

L'interprétation des sérologies CMV est très difficile : il existe des réactions croisées lors d'autres infections herpétiques, il est difficile de différencier une primo-infection d'une réactivation...

Le CMV est un virus facile à isoler en culture cellulaire.

L'échantillon est inoculé sur des cellules fibroblastiques embryonnaires humaines (MRC5). Après incubation, la présence du virus dans l'échantillon initial est révélé par l'apparition d'une ECP qui peut prendre 4 à 6 semaines! On observe un aspect en « banc de poissons »

On a développé une technique de culture rapide : après inoculation et incubation de l'échantillon sur les MRC5, on recherche des protéines précoces du CMV par immunoperoxydase au bout de 48h de culture.

Sur les photos suivantes, on observe : à gauche, un ECP de CMV sur MRC5 : cellules ballonisées, groupées en foyer. Aspect en "banc de poissons". à droite, une image de révélation d'une culture rapide par immunoperoxydase avec la coloration en brun des noyaux des cellules infectées.

Révélations de cultures de CMV

C'est une technique qui permet de quantifier le nombre de cellules infectées par le CMV dans le sang circulant. La présence de CMV dans les cellules du sang (le polynucléaires) est détectée par IF avec un Ac. monoclonal dirigé contre la protéine de tégument du CMV, la protéine pp65.

A partir d’un prélèvement de sang sur EDTA, On sépare des leucocytes des autres éléments du sang, on réalise un comptage pour déposer 2x105 cellules/spot d'IF. On réalise l'IF avec un Ac. anti-pp65 On fait le décompte des cellules infectées qui apparaissent florescentes. On exprime les résultats en : nb de cellules infectées/ 2x105 cellules

Résultat d'une antigénémie pp65 du CMV.

Ces méthodes sont utiles surtout pour l'étude des liquides amniotiques et des humeurs aqueuses. On peut prélever :

• sang, biopsies, LBA, liquide amniotique, humeur aqueuse

• Possibilité de congeler l'échantillon avant traitement

Il existe différentes techniques de PCR permettant de mettre en évidence le génome viral dans un échantillon initial. Ces techniques sont très sensibles et spécifiques, elles permettent d'obtenir un résultat rapide et certaines étapes sont en cours d'automatisation (extraction de l'ADN par exemple).