Paramètres spectroscopiques
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Le spectre d'émission de fluorescence représente la répartition des longueurs d'onde des photons émis
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Il est :
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caractéristique de l'atome ou la molécule et permet donc une analyse qualitative .
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approximativement une image inversée (effet miroir) du spectre d'absorption.
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L' intensité correspond au nombre de photons émis par unité de temps dans des conditions d'excitation données. Ce nombre est proportionnel au nombre d'atomes ou de molécules présents dans le milieu et donc à la concentration. Ceci permet une analyse quantitative .
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Le rendement quantique de fluorescence rend compte de la compétition entre les phénomènes de désexcitation radiatifs et non radiatifs.
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Il correspond au rapport du nombre de photons émis sur le nombre de photons absorbés par un fluorophore. (ou nombre de photons émis/ nombre de molécules excitées). C'est aussi la « « probabilité » » pour qu'une molécule excitée émette un photon.
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(molécule non fluorescente)
(pas d'autres processus de désexcitation)
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La durée de vie de fluorescence , τf, ou temps de déclin de fluorescence correspond à la durée de vie moyenne de l'état excité, temps moyen pendant lequel une molécule fluorescent demeure excitée.
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La plupart des fluorophores ont des durées de vie de l'ordre de la nanoseconde (grandeur mesurable selon l'appareillage).
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On définit l'efficacité par :
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Chaque molécule peut être caractérisée par des spectres d'absorption et d'émission qui lui sont propres et qui reflètent la distribution de probabilités des transitions énergétiques. Ils sont caractéristiques de la structure énergétique des molécules.
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Les différentes caractéristiques de l'émission de fluorescence : spectre, rendement quantique, durée de vie de fluorescence et efficacité ne constituent la signature d'une molécule que sous certaines conditions. En effet, ces paramètres dépendent fortement de l'environnement local de la molécule (polarité, pH, concentrations, température, quenching).
