VI-1. Le diagnostic est basé avant tout sur le diagnostic direct, par isolement de Listeria monocytogenes dans les prélèvements

Chez la femme enceinte, le prélèvement de choix est la réalisation d'hémocultures devant toute fièvre inexpliquée.

Au cours de l'accouchement le placenta, les lochies et/ou le liquide amniotique peuvent être analysés.

Pour le nouveau-né dans les formes précoces, la bactérie est souvent isolée du liquide gastrique et du méconium. Un prélèvement cutané, de sécrétions nasales ou conjonctival peut être effectué. Des hémocultures et un prélèvement de LCR sont importants à réaliser.

Pour le nouveau-né dans les formes tardives, les prélèvements de choix sont le LCR et les hémocultures.

Pour les autres formes, le prélèvement est lié à la symptomatologie clinique (LCR, hémocultures, ...).

L'examen microscopique direct montre des petits bacilles à Gram positif, réguliers, associés en palissade et diplobacilles et quelquefois en courtes chaînes. Ils doivent être différenciés des Lactobacillus, des bactéries corynéformes et quelquefois de certains streptocoques.

• Dans le LCR., les Listeria monocytogenes peuvent se trouver en position intra-cellulaire dans le cytoplasme des polynucléaires neutrophiles, et sont souvent en faible quantité.

• En cas de méningite, l'examen cytologique du LCR peut révéler de quelques dizaines à plusieurs centaines d'éléments nucléés. La formule cytologique peut être à majorité de polynucléaires neutrophiles ou bien avoir l'aspect caractéristique "panachée" associant polynucléaires neutrophiles et lymphocytes. La protéinorachie est augmentée et la glycorachie diminuée.

L'ensemencement

• En pratique courante, l'isolement de Listeria monocytogenes  est réalisé sur gélose au sang (à 5% de cheval ou mouton) à 37°C, en atmosphère aérobie,  afin d'obtenir une croissance optimale et d'observer une zone hémolyse de type bêta (hémolyse complète des hématies), souvent étroite.

• Les colonies sont circulaires, lisses, translucides, de 1 à 1.5 mm de diamètre après 24h d'incubation à 37°C.

• La gélose au sang + acide nalidixique (Négram) permet d'isoler plus facilement la bactérie à partir de prélèvements plurimicrobiens, l'acide nalidixique inhibant  un certain nombre de bacilles à Gram négatif.

L'identification des bactéries

• La morphologie au Gram, l'aspect des colonies sur gélose au sang, la croissance en aérobie et anaérobie, la présence d'une catalase et l'absence d'oxydase permettent une orientation vers le genre Listeria et conduisent à la réalisation d'une galerie d'identification de type Api Listeria bioMérieux.

• La caractérisation plus fine des souches est effectuée par le CNR Listeria afin de comparer les souches isolées des infections humaines entre-elles et éventuellement, en cas de cas groupés, de les comparer aux souches isolées de produits alimentaires.

L'antibiogramme :

• Listeria monocytogenes  est sensible habituellement aux aminopénicillines (amoxicilline), aux aminosides (comme gentamicine, nétilmicine, amikacine), aux macrolides, aux tétracyclines, aux sulfamides, au triméthoprime, à la rifampicine, à la vancomycine.

• Cette bactérie présente une résistance naturelle à l'acide nalidixique et à la colistine.

• Les céphalosporines dont celles de troisième génération ainsi que les fluoroquinolones et la fosfomycine sont inefficaces dans le traitement des listérioses.

• Des résistances acquises ont été décrites pour les tétracyclines, l'érythromycine, le triméthoprime, la rifampicine, la kanamycine.