Diagnostic indirect
Le diagnostic indirect cherche à mettre en évidence des anticorps synthétisés en réaction à une infection virale. Ces anticorps sont les marcueurs indirects de l'infection. Comme pour toute infection, on distingue :
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les IgM : marqueurs d’une infection aiguë
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les IgG : marqueurs d'une infection passée
La recherche d'anticorps permet donc de différencier, comme le montre l'image ci-dessous, une infection récente si des IgM sont présents d'une immunisation vis-à-vis d'une infection si des IgG sont présents.
Diagnostic d'une infection récente
Elle repose surtout sur la mise en évidence de la présence d’IgM. Comme pour toutes les infections, la synthèse des IgM est décalée dans le temps par rapport à l'infection. Il faut en général quelques jours après une contamination pour que des IgM soient synthétisées. Cependant, dans la grande majorité des infections virales, les IgM sont présentes en même temps que les signes cliniques de la maladie. C'est par exemple le cas lors des hépatites aiguës à virus de l'hépatite A comme le montre le schéma de la cinétique des anticorps.
La recherche d'IgM se fait en général sur un seul échantillon de sang prélevé dès l'apparition des signes cliniques.
Certains virus sont dits latents, c'est la grande particularité des virus de la famille des Herpesviridae. Cette particularité repose sur le fait qu'après une primo-infection, le virus persiste indéfiniment dans l'organisme. Régulièrement, le virus présent chez la personne porteuse peut se remettre à se multiplier, on parle de réactivation virale.
Dans ce cas de figure très particulier, on observe la présence d'IgM au cours de la primo-infection puis sont synthétisés des IgG. Au cours des réactivations virales, on observe de façon inconstante la présence d'IgM .
Le diagnostic peut alors être posé en recherchant une élévation des IgG. Pour cela, on réalise une recherche des IgG sur 2 prélèvements de différents réalisés à15 jours d'intervalle. On parle d'élévation significative des IgG si le taux d'IgG est multiplié par 4. C'est le signe d'une infection récente.
Diagnostic d'une infection passée
Dans un certain nombre de cas, on peut avoir besoin de savoir si une personne à été en contact avec un virus donné.
Chez les jeunes femmes en âge d'avoir des enfants, on recherche la présence d'une immunité protectrice contre la rubéole afin de proposer la vaccination si cette immunité n'existe pas. Pour cela, on recherche la présence d'IgG seules, à un taux satisfaisant.
Avant une vaccination contre le virus de l'hépatite A (VHA), on peut rechercher l'existence d'une immunité protectrice naturelle chez le candidat à la vaccination. Pour cela, on recherchera la présence d'IgG anti-VHA. La présence d'IgG seuls chez une personne qui n'a jamais été vaccinée signe une infection passée et guérie (voir schéma de la cinétique des anticorps anti-VHA). |
Enfin, la mise en évidence d'IgG spécifiques d'un virus peut permettre le diagnostic d'infections chroniques comme les infections par le virus de l'hépatite C (VHC). En effet, au cours des infections à VHC, l'épisode aigü est exceptionnellement symptomatique. Le diagnostic n'est posé qu'au bout de plusieurs années d'évolution de la maladie. Dans ce cas, les IgM ont disparu et seuls des IgG anti-VHC sont détectables. |
La recherche d'IgG dans ces différents contextes se fait sur un seul échantillon de sang.
Le diagnostic indirect permet donc de rechercher des anticorps spécifiquement dirigés contre un virus afin de déterminer si la personne testée a été récemment en contact avec ce virus (présence d'IgM). On peut aussi rechercher des IgG qui permettent de connaître la statut d'une personne vis-à-vis d'un virus : immunisation, infection guérie ou infection chronique.
Les techniques permettant la recherche d'anticorps sont les techniques de sérologies. Elles s'appliquent le plus souvent sur du sérum mais on peut aussi rechercher des anticorps dans le liquide céphalo-rachidien par exemple. Les deux principales techniques que nous allons développer sont la technique ELISA permettant la recherche d'anticorps et la technique de western blot.
Technique ELISA indirect pour rechercher des anticorps : principes et intérêts.
La technique ELISA (Enzyme-linked immuno-Sorbent Assay) est basée sur la détection d'anticorps grâce à des antigènes viraux fixés au fond d'un puits de microplaque. Les interactions antigène-anticorps sont révélées par une réaction enzymatique colorée.
 Automate permettant la réalisation d'ELISA en microplaques.Info5 | Les intérêts de l'ELISA en général sont :
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Exemple de recherche d'anticorps par ELISA :
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recherche d'IgG et d'IgM anti-rubéole chez des femmes enceintes,
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sérologies de dépistage pour l'infection par le VIH,
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Recherche d'aticorps anti-HBs pour vérifier une vaccination contre le virus de l'hépatite B (VHB).
Technique de western blot pour rechercher des anticorps : principes, intérêts et inconvénients.
La partie haute de la figure montre comment sont préparées des bandelettes utilisées pour réaliser un western blot. Ces différentes étapes sot réalisées par les firmes pharmaceutiques qui commercialisent les bandelettes. Une suspension de protéines virales est déposée dans des puits d'un gel de polyacrylamide. Lors de l'électrophorèse qui suit, les protéines sont séparées en foction de leur taille dans le gel. Les protéines les plus lourdes migrent plus lentement. A la fin de l'élctrophorèse, les protéines contenues dans le gel et séparées en fonction de leur taille sont transférées sur une membrane de nylon. Cette membrane est découpée en bandelettes qui sont commercialisées. Dans les laboratoires de virologie, le sérum à tester est déposé sur une bandelette (partie basse du schéma). Les anticorps potentiellement présents dans le sérum reconnaissent les protéines virales (antigènes) fixés sur la bandelette. Après incubation et lavages, les interactions anticorps-antigènes sont révélées par une réactions enzymatique colorée. |
Les intérêts du western blot sont en général :
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la très grande spécificité des anticorps détectés,
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la possibilité d'une étude analytique des anticorps dirigés contre les différentes protéines virales
Cette technique est utilisée comme test de confirmation pour :
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Infection par le VIH
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Infection par le VHC (RIBA)
Diagnostic de l‘infection par le VIH-1
Le diagnostic d'une infection par le VIH repose sur :
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Un dépistage sérologique reposant sur la recherche d'anticorps par deux techniques ELISA provenant de deux fournisseurs différents réalisés sur deux échantillons de sérum différents.
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La confirmation de l'infection par analyse du second échantillon en western blot.
Avantages et Inconvénients de la sérologie virale
Les principaux avantages sont :
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la rapidité d'exécution des analyses,
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l'automatisation des techniques,
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la sensibilité des recherches d'anticorps
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la spécificité des anticorps mis en évidence
Le principal inconvénient est :
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les méthodes de sérologie ne permettent qu’un diagnostic rétrospectif
Cependant, les techniques de sérologies sont des outils indispensables pour le diagnostic des Important infections chroniques ou des infections materno-foetales.
