Préparation du système chromatographique
1. Conditionnement de la cartouche :
Ce conditionnement a pour objectif de laver la phase stationnaire imprégnée d'agents conservateurs. Après avoir placé sous vide modéré le système( -20 KPa / -5 inHg, robinet ouvert lorsque la pompe à vide est suffisamment efficace), afin de permettre un écoulement au goutte à goutte, faites traverser la phase stationnaire par 2 volumes d'eau distillée (1 volume correspondant à la capacité de remplissage complet de la cartouche soit 3 mL ), 2 volumes de MeOH, puis à nouveau 2 volumes d'eau distillée. La cartouche est prête à l'emploi. |  |
Attention :
Tout au long de la manipulation, Il est important de ne JAMAIS porter à sec la cartouche de silice.
NB : pour qu'il y ait élution, penser à ouvrir l'embout et seulement celui-ci, portant la cartouche, en tournant (sens inverse des aiguilles d'une montre).
2. Dépôt de l'extrait
Après avoir filtré votre extrait au travers d'une pipette Pasteur garnie de coton dans un tube à hémolyse (que nous récupérerons en fin de séance), déposez en 200 l, au sommet de la cartouche, à l'aide du pipetman de 1 mL . L'idéal est de procéder à ce dépôt sans application de vide, ie en laissant l'extrait imprégner le support solide « à son rythme » (environ 3 min « d'imprégnation »).
3. Elution des composés
 | L'élution séquentielle, sous vide modéré, des divers composés présents dans l'extrait, est rendu possible grâce à la mise en place d'un gradient d'élution. Pour se faire, la phase mobile polaire de départ est progressivement incrémentée d'un solvant de polarité moindre. Nous avons choisi de travailler avec une phase mobile eau / méthanol. Le gradient suivant vous est proposé :
NB : parce que les cartouches sont réutilisables, pensez à finir par un rinçage à l'aide de 2 volumes d'eau distillée puis 2 volumes d'un mélange de reconditionnement Eau/MeOH (50 :50, v/v). |
4. Constitution des « blocs »
En fonction du profil chromatographique (profil CCM) des 6 fractions éluées, procéder à leur regroupement, afin de constituer des blocs enrichis en composés distincts. Concentrer à sec le bloc renfermant majoritairement de l'EGCG.
