Dosage dans le sang
Les dosages dans le sang peuvent être regroupés sous deux méthodes (figure 18). Une méthode destructrice qui consiste à dénaturer la carboxyhémoglobine afin de libérer le CO pour le doser, et une méthode non destructrice qui consiste à déterminer le pourcentage de carboxyhémoglobine présent dans l'échantillon à analyser. Dans tous les cas, le prélèvement de l'échantillon doit être effectué le plus rapidement possible, dans un tube avec anticoagulant (fluorure de sodium ou EDTA) parfaitement rempli afin d'éviter la libération progressive de CO de l'échantillon de sang.
Méthodes destructrices
Méthode par spectrophotométrie infrarouge des gaz extraits du sang
Le sang est introduit dans une ampoule à double robinet à l'intérieur de laquelle un vide a été établi. La carboxyhémoglobine est dénaturée par action de l'acide phosphorique à chaud. Le CO est alors libéré dans l'ampoule puis entraîner par un courant d'azote vers un analyseur infrarouge (étalonné avec des quantités connues de CO pour un dosage précis). Il s'agit d'une méthode rapide (10 à 15 minutes).
Méthode par microdiffusion
Cette méthode repose sur la réduction de sels de palladium par le CO. On utilise un appareil à deux compartiments en communication. Dans l'un on réalise la libération des gaz du sang (dont le CO) à l'aide d'un réactif dénaturant ; dans l'autre compartiment, on introduit le CO libéré qui va servir à la réduction du chlorure de palladium et la libération de protons. L'acidité apparue est titrée au moyen d'une solution aqueuse d'hydroxyde de potassium. Une autre méthode consiste à doser le Palladium formé par colorimétrie à l'aide d'un réactif phosphomolybdotungstique. Cette méthode présente le double inconvénient d'être longue et de ne pouvoir être confiée qu'à un personnel qualifié.
Remarque :
Ces méthodes donnent un résultat exprimé en mL de CO pour 100 mL de sang. Elles ne renseignent pas sur le taux de carboxyhémoglobine, il faut pour cela en parallèle effectuer des dosages d'hémoglobine.
Méthodes non destructrices
Elles sont basées sur l'évaluation directe du % d'HbCO : Ce sont principalement des méthodes spectrophotométriques basées sur les propriétés de l'hémoglobine, de l'oxyhémoglobine et de la carboxyhémoglobine qui présentent, dans la région visible, des spectres d'absorption se distinguant par le nombre et les positions des maxima d'absorption. L'hémoglobine ne présente qu'une seule bande d'absorption dont le maximum est à 556 nm, l'oxyhémoglobine présente un spectre d'absorption à deux bandes dont les maxima se situent à 576 et 540 nm et la carboxyhémoglobine se caractérise par deux bandes avec des positions maximales à 570 et 538 nm (figure 19).
Parmi les méthodes utilisées, on peut citer entre autre la méthode de Commins qui compare l'absorption du sang oxycarboné dilué dans l'ammoniaque à 0,04 % à celle du même sang dilué où le CO a été chassé par barbotage d'O2. On enregistre la différence des absorptions de la carboxyhémoglobine et de la quantité équivalente d'oxyhémoglobine et on en déduit le pourcentage de carboxyhémoglobine.
Ces méthodes sont moins sensibles et moins précises que les méthodes réalisant l'examen des gaz extraits du sang.
