Chromatographie préparative sur plaque
Préparation des plaques chromatographiques préparatives :
Préparer le dispositif, « étaleur de plaque, plaques de verre » (3 ou 4 plaques par binôme) de telle sorte qu'il soit possible de procéder à l'étalement directement après la préparation du support solide.
Préparer ensuite un mélange homogène (= une pâte sans grumeau) à partir d'environ 50 g de silice GF 254 (silice renfermant un indicateur de fluorescence à 254 nm et du plâtre) et 100 mL d'eau distillée : 1g de silice / 2mL d'eau.
Sous une hotte efficace, dans un bocal préalablement taré, placer environ 10 cuillères à soupe de silice. Le bocal refermé, évaluer la quantité de silice présente.
En fonction de votre pesée, additionner la quantité suffisante et nécessaire d'eau.
Refermer le bocal et homogénéiser la mixture. Il est possible que vous soyez obligés d'additionner un peu d'eau au mélange, afin d'arriver à la bonne consistance (type pâte à crêpes épaisse).
Le mélange préparé est placé rapidement (avant qu'il ne sèche) dans l'étaleur de plaques puis étalé immédiatement après.
 Zone de dépôt du mélange | La plaque de verre, une fois garnie de support solide, est placée sur la paillasse puis tapotée (plaque légèrement soulevée, 0.5 cm environ, puis relâchée sur la surface plane) ceci afin de s'assurer de la répartition homogène du support, mais également afin de faire remonter les éventuelles bulles d'air en surface. Les plaques seront placées ultérieurement à sécher environ 24h dans une étude à 90°C. Préconditionnement des plaques : Il peut être nécessaire de laver les plaques avant la séparation. Cette opération peut être effectuée par migration d'un solvant approprié. Les plaques peuvent aussi être imprégnées par des procédés tels que le développement, l'immersion ou la pulvérisation. Au moment de leur utilisation, les plaques peuvent être activées si nécessaire, par chauffage à l'étude à 100-105°C pendant 1 heure. |
Préparation de la phase mobile :
Dans un erlen propre et sec de 250 mL préparer le mélange homogène suivant : Eau, acide formique, méthyléthylcétone, acétate d'éthyle dans des proportions 1/1/3/5(v/v/v/v). 50 mL seront nécessaires au remplissage de la cuve à chromatographier.
Placer la cuve à saturation.
Préparation de l'extrait :
Chauffer à ébullition 2 g de boutons floraux pulvérisés avec 15 mL d'éthanol à 70% pendant 2 mm. Filtrer sur papier directement dans un ballon à col rodé propre et sec de 100 mL . Evaporer jusqu'à siccité (évaporateur rotatif), puis reprendre le résidu avec 4 mL de méthanol. Il sera nécessaire de placer le ballon à chaud (bain marie à 70°C) pour faciliter la solubilisation de l'extrait, voire même de « soniquer » la solution. Vous procéderez ensuite à une filtration sur papier filtre de l'extrait. 1 mL de cet extrait sera déposé sur une plaque préparative à l'aide d'une pipette Pasteur.
 | Déposer le soluté en portions suffisamment petites pour obtenir une bande peu large, placée à une distance appropriée du bord inférieur (environ 3 cm, seconde encoche) et des côtés de la plaque (environ 1,5 cm). Il est probable que vous soyez amenés à déposer plusieurs fois sur la même bande auquel cas, n'hésitez pas à sécher au sèche-cheveux entre chaque dépôt et avant de placer la plaque à développer. Laisser le développement s'effectuer jusqu'en haut de plaque (arrêter à au moins 1 cm du sommet !). Compter 1h15 à 1h30 environ. Il est possible d'effectuer une double migration de la plaque afin d'optimiser la résolution des bandes. Pour une question de temps, nous nous limiterons en TP à une simple migration. Sécher la plaque et récolter la bande d'intérêt par « grattage » au moyen d'une spatule, en ayant pris soin de placer sous la plaque, une feuille d'aluminium qui servira à récolter la silice grattée. |
Elution du composé d'intérêt :
Placer le complexe formé « analyte/silice » dans un erlen de 100mL , additionner 20 mL d'acétate d'éthyle, puis « soniquer » le mélange (erlen placer dans la cuve à ultrasons). Filtrer ensuite sur verre fritté porosité 4. Le filtrat recueilli est concentré à sec dans un ballon à col rodé de 100 mL préalablement taré. Il se forme une laque sur la paroi du ballon. Calculer le rendement d'extraction. |  |
Evaluation du degré de pureté :
IR : gratter la paroi du ballon afin d'avoir suffisamment d'extrait sec pour procéder à la mesure du spectre IR. Il est possible de récupérer la poudre déposée sur le diamant, une fois la mesure effectuée.
CCM : 1mL de méthanol est additionné à l'extrait sec, pour sa mise en solution. L'extrait obtenu sera utilisé tel que, pour la vérification par CCM, du degré de pureté du rutoside.
