B2-2. Chromatographie en phase gazeuse des 4 terpènes témoins : Menthol, Menthone, Acétate de Menthyle, Carvone purs. Analyse qualitative et quantitative des huiles essentielles de menthe verte et poivrée.
a) Conditions opératoires :
Chromatographe : Perkin-Elmer Autosystem XL.
Injecteur :
- Température de la chambre d'injection : 250°C
- Mode : splitless
- Gaz vecteur : azote N2
débit : 15 psi
Colonne : Colonne capillaire Restek MXT-WAX ; longueur 30 m ; diamètre interne 0,53 mm ; porosité 0,50 µm.
Détecteur à ionisation de flamme (FID) :
- Température : 250°C (filament chauffé).
- Intégration du signal : range = 1 ; atténuation = 8.
- Allumer la flamme grâce à l'arrivée d'air (brancher la pompe) et l'hydrogène.
- Les constituants poussés par l'azote sont détectés à leur sortie de la colonne.
b) Méthode d'analyse
En CPG, deux paramètres sont essentiels pour optimiser la séparation de substances en mélange : le débit du gaz vecteur (fixé ici à 15 psi) et la température de la colonne. Celle-ci se trouve dans une enceinte thermostatée programmable. L'influence de la température de la colonne sur les temps de rétention est capitale : plus on chauffe, plus on diminue le temps de rétention et la largeur des pics, jusqu'à obtenir une superposition des pics, néfaste à la séparation. Il s'agit donc de choisir une programmation adéquate des températures afin que l'analyse soit la plus courte et la plus performante possible.
La programmation du four est la suivante :
75°C, 1 min.
augmenter la température de 10°C/min jusqu'à 160°C.
puis augmenter la température de 20°C/min jusqu'à 240°C.
240°C, 1,5 min.
c) Manipulation proprement dite
Injecter 0,1 µL des solutions de terpènes témoins purs ou en mélange.
Etude du temps de rétention tR (équivalent au Rf en C.C.M.). Le temps de rétention lié à la polarité est caractéristique de chaque substance dans des conditions opératoires précises.
Localiser sur le chromatogramme les pics du menthol, de l'acétate de menthyle, de la menthone, de la carvone.
