Question 11
Question
Exprimez le rapport v0/Vm en fonction du nombre de Km. Que peut-on en déduire pour la détermination d'une activité enzymatique ?
Si S = nKm alors v0 = nVm.Km/(Km + nKm)
et donc v0 = [n/(n + 1)].Vm
L'emploi de fortes concentrations de S, de 10 à 100 fois la valeur de Km, permet des mesures de vitesse sur des temps longs et pour des concentrations d'enzyme élevées (relativement).
Complément :
Il est donc intéressant d'exprimer la concentration de substrat en nombre de Km ; cela permet de savoir en quelle proportion de Vmax se trouve la vitesse initiale mesurée.
Par exemple, si S = 1 Km bien sûr v0 = 1/2 Vm soit 50 % de la Vmax ; si S = 3 Km, v0 = 3/4 Vm soit 75 % de la Vmax ; si S = 10 Km, v0 = 10/11 Vm soit environ 91 % de la Vmax ; et encore si S = 100 Km, v0 = 100/101 Vm soit 99 % de la Vmax. Ceci confirme que pour tracer l'asymptote du graphe de Michaelis-Menten, il faut utiliser une gamme de concentrations de substrat allant jusqu'à 100 Km, ce qui n'est pas toujours réalisable (solubilité du substrat, prix, toxicité par exemple s'il est radio-marqué, inhibition par le substrat...).
Autre conséquence pour la détermination d'une activité enzymatique, l'emploi de concentrations de substrat entre 10 et 100 Km permet de travailler très près de la Vmax (plus de 90 %), et ainsi d'assurer la linéarité de l'essai enzymatique sur une large gamme de temps de mesure et de concentrations d'enzyme.
